濾光片在流式細胞儀中應用

濾光片在流式細胞儀中應用

流式細胞儀是測量染色細胞標記物熒光強度的細胞分析儀，是在單個細胞分析和分選基礎上發展起來的對細胞的物理或化學性質（如大小、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等）進行快速測量并可分類收集的高技術儀器。

流動細胞儀主要有以下五部分構成：

1.                      流動室及液流系統

2.                      激光源及光學系統

3.                      光電管和檢測系統

4.                      計算機和分析系統

流動室及液流系統

流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成，常用光學玻璃、石英等透明、穩定的材料制作。樣品管貯放樣品，單個細胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出；鞘液由鞘液管從四周流向噴孔，包圍在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液流是穩液，一般限制液流速度υ<10m/s。

激光源及光學系統

經特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發才能發出熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈和激光；激光器又以氬離子激光器為普遍，也有配和氪離子激光器或染料激光器。

在激光光源和流動室之間有兩個圓柱形透鏡，將激光光源發出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成和細胞的直徑相近，在這種橢圓形激光光斑內激光能量成正態分布，使通過激光檢測區的細胞受照強度一致。而光學系統則是由若干組透鏡、小孔、濾光片組成，主要作用是將不同波長的熒光信號送到不同的光電倍增管。

光電管和檢測系統

經熒光染色的細胞受合適的光激發后所產生的熒光是通過光電轉換器轉變成電信號而進行測量的。光電倍增管（PMT）最為常用。PMT的響應時間短，僅為ns數量級；光譜響應特性好，在200～900nm的光譜區，光量子產額都比較高。也有用硅光電二極管的，它在強光下穩定性比PMT好。

計算機和分析系統

經放大后的電信號被送往計算機分析器。多道的道數是和電信號的脈沖高度相對應的，也是和光信號的強弱相關的。對應道數年縱坐標通常代表發出該信號的細胞相對數目。多道分析器出來的信號再經模-數轉換器輸往微機處理器編成數據文件

流式細胞儀主要用到三類濾光片：

1：長波通濾光片（LPF）--只允許特定波長以上的光線通過；

2：短波通濾光片（SPF）--只允許特定波長以下的光線通過；

3：帶通濾光片（BPF）--只允許特定波長的光線通過

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